文庫(kù)介紹

cDNA 文庫(kù)（Complementary DNA Library）是指某生物某發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄的全部 mRNA 經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成的 cDNA 片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。cDNA 是便于克隆和大量 表達(dá)，它不像基因組含有內(nèi)含子而難于表達(dá)，因此可以從 cDNA 文庫(kù)中篩選到所需的目的 基因，并直接用于該目的基因的表達(dá)。

通過(guò)構(gòu)建 cDNA 表達(dá)文庫(kù)可以提供構(gòu)建分子標(biāo)記連鎖圖譜的所用探針 ，更重要的是可 以用于分離全長(zhǎng)基因進(jìn)而開(kāi)展基因功能研究。因此，cDNA 文庫(kù)在研究具體某類特定細(xì)胞中 基因組的表達(dá)狀態(tài)及表達(dá)基因的功能鑒定方面具有特殊的優(yōu)勢(shì)，從而使它在個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞 分化、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞衰老和死亡調(diào)控等生命現(xiàn)象的研究中具有更為廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

優(yōu)爾生公司 cDNA 文庫(kù)

構(gòu)建方法：

優(yōu)爾生構(gòu)建 cDNA 文庫(kù)是采用 Oligo(dT)作逆轉(zhuǎn)錄引物，給所合成的 cDNA 加上特異性設(shè) 計(jì)連接接頭，連接到進(jìn)行過(guò)優(yōu)爾生公司改造后的 pUSCN 載體中獲得文庫(kù)。

USCN 文庫(kù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

1.插入 cDNA 片段>700bp；

2.文庫(kù)容量（滴度）達(dá)到 10*6 次方；

3.隨機(jī)選取 20 個(gè)轉(zhuǎn)化后的克隆進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證，判斷是否是該物種的 cDNA；

圖 1 隨機(jī)挑取 23 個(gè)克隆 PCR 鑒定插入片段大小

PCR 使用 M13 引物，其中第 13 道為 200bp Marker，第 24 道為 1000bp Marker

現(xiàn)有文庫(kù)：

人，小鼠，大鼠，豬，牛等物種的各個(gè)組織的普通文庫(kù)；

目前提供的是一級(jí)文庫(kù)（質(zhì)粒是克隆質(zhì)粒），可用于釣取基因，客戶用于酵母雙雜或其 他實(shí)驗(yàn)，是需要繼續(xù)進(jìn)行制備二級(jí)文庫(kù)（用戶需特殊聲明）。

定制服務(wù)流程

服務(wù)內(nèi)容：

1 客戶樣品 RNA 提?。篢otal RNA 的提取、mRNA 的分離；

2 雙鏈的合成：第一鏈合成、 連接接頭和第二鏈合成和擴(kuò)增；

2 插入片段大小篩選 ：對(duì)合成的 cDNA 雙鏈進(jìn)行長(zhǎng)度篩選；

3 鏈接載體：將長(zhǎng)度篩選的 cDNA 與 pUSCN 載體進(jìn)行連接反應(yīng)；

4 轉(zhuǎn)化：將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞；

5 文庫(kù)的質(zhì)控：檢測(cè) cDNA 文庫(kù)庫(kù)容量以及每個(gè)文庫(kù)隨機(jī)挑取 20 個(gè)克隆子，PCR 檢測(cè) 插入片段大小和插入率。

提供結(jié)果：

1 -20oC 保存的 cDNA 文庫(kù)的甘油菌液；

2 文庫(kù)構(gòu)建報(bào)告：包括文庫(kù)的庫(kù)容，平均插入大小，重組率，cDNA 的完整性等等。