眾所周知，在基因工程領(lǐng)域，常用的表達(dá)系統(tǒng)共有三種，包括：原核表達(dá)系統(tǒng) (大腸桿菌 E. coli 表達(dá)系統(tǒng))、酵母表達(dá)系統(tǒng)(P. Pichia 表達(dá)系統(tǒng))和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表 達(dá)系統(tǒng)。原核表達(dá)系統(tǒng)由于操作簡(jiǎn)單、成本低廉、表達(dá)效率高等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用 于外源基因的蛋白表達(dá)。但同時(shí)，原核表達(dá)體系也有一些自身的缺點(diǎn)，比如容易形 成包涵體，不能進(jìn)行翻譯后加工等等。

為了盡量避免原核表達(dá)系統(tǒng)自身的不足，Cloud-Clone Corp.又另外開發(fā)建立了 酵母表達(dá)平臺(tái)。酵母表達(dá)外源基因具有一定的翻譯后加工能力，收獲的外源蛋白質(zhì) 具有一定程度上的折疊加工和糖基化修飾，性質(zhì)較原核表達(dá)的蛋白質(zhì)更加穩(wěn)定，特 別適合于表達(dá)真核生物基因和制備有功能的表達(dá)蛋白質(zhì)。某些酵母表達(dá)系統(tǒng)具有外 分泌信號(hào)序列，能夠?qū)⑺磉_(dá)的外源蛋白質(zhì)分泌到細(xì)胞外，因此很容易純化。

酵母表達(dá)外源基因的一般步驟如圖 1 所示，但是 Cloud-Clone Corp.在開發(fā)過程 中發(fā)現(xiàn)，原有的酵母表達(dá)系統(tǒng)也存在一定不足，比如誘導(dǎo)物甲醇易在培養(yǎng)過程中揮 發(fā)，濃度會(huì)降低，從而影響最終蛋白的產(chǎn)量等。針對(duì)這些不足，Cloud-Clone Corp. 又將以上系統(tǒng)進(jìn)行了以下改進(jìn)：

1. 在加入甲醇誘導(dǎo)目標(biāo)蛋白表達(dá)過程中，通過不斷調(diào)整甲醇濃度，保持表達(dá) 體系穩(wěn)定性，以達(dá)到菌株的最佳擴(kuò)增條件，保證目標(biāo)蛋白產(chǎn)量的最大化；

2. 在培養(yǎng)含陽性克隆的酵母擴(kuò)增期間，通過改良培養(yǎng)瓶的封口裝置，以提高 酵母擴(kuò)增效率；

3. 在通過 SDS-PAGE 電泳檢測(cè)培養(yǎng)上清中目標(biāo)蛋白的表達(dá)情況后，根據(jù)不同 蛋白的特性，對(duì)表達(dá)條件及純化方式進(jìn)行再次優(yōu)化。

通過 Cloud-Clone Corp.的表達(dá)平臺(tái)優(yōu)化，目標(biāo)蛋白的表達(dá)效率及純度都有了更 一步地提升，如圖 2 所示，在經(jīng)過改良擴(kuò)增及純化方案之后，酵母表達(dá)的人 CCL18 蛋白在純化后（Lane 2），相對(duì)于純化前（Lane 1），在產(chǎn)量和純度方面都有了很 大提高，更能滿足科研人員的需要。

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