Caspase家族作為細胞凋亡過程中的中心環(huán)節(jié)和執(zhí)行者，與細胞凋亡等形態(tài)學特征密切相關，近年來受到了廣泛的關注。Caspase-1是Caspase 家族第一個被發(fā)現(xiàn)的蛋白，早在1992年人類就克隆并測序其cDNA，隨后Caspase家族相繼共有14個成員被克隆出。Caspase-1作為凋亡機制中重要的效應成分，主要參與細胞因子介導的炎癥反應并在死亡受體介導的細胞凋亡途徑中起輔助作用，參與IL- 1β 的成熟和轉(zhuǎn)運，同時還參與凋亡有關的生理和病理過程，在諸如生長因子、熱休克、細胞因子和DNA損傷劑等刺激作用下，共同介導細胞內(nèi)多種凋亡信號傳導途徑。

近年來有關Caspase-1的表達研究十分的活躍，其中的研究熱點就是ATP及脂多糖LPS共激活Caspase-1的表達。圖1是ATP及LPS共激活的信號通路（參考Animal Biotechnology），從中可以看到，當給予ATP 及LPS刺激作用于單核細胞后，可以提高位于細胞膜上的受體蛋白P2X7的表達量，從而導致ca離子內(nèi)流，k離子外流，這種離子流進一步激活NLRP3蛋白的表達，從而激活pro-caspase-1的蛋白表達量，進而提高Caspase-1的表達量。

Cloud-Clone Corp.公司研制的Caspase-1酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(SEB592Hu)可準確定量檢測THP-1細胞中Caspase-1的含量。

圖1：ATP及LPS共激活Caspase-1的信號通路

實驗方案：

一，ATP誘導激活Caspase-1的表達

1）收集人的單核細胞THP-1，加入基礎培養(yǎng)基RPMI1640，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)細胞使其濃度達到106/ml，再加入1ml RPMI1640培養(yǎng)基，過夜培養(yǎng)。

2）過夜培養(yǎng)12h的細胞，加入終濃度為1ug/ml的LPS，刺激培養(yǎng)3h后，再次加入終濃度為5mM的ATP溶液（100mM，pH =7）激活培養(yǎng)2h。

二，THP-1細胞上清及內(nèi)含物的收集

培養(yǎng)好的細胞，收集細胞上清及細胞。對于上清液，1000g離心20分鐘，將上清用于后續(xù)的含量檢測。細胞內(nèi)含物，先用預冷的PBS洗3次，用物理（超聲破粹或者反復凍融）或者化學方法（細胞裂解液）裂解細胞，1000g離心20分鐘，取上清進行檢測。

三，Caspase-1的定量檢測

分別取上清溶液，使用半胱天冬酶Caspase-1酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(SEB592Hu)定量檢測樣本中Caspase-1的含量。

實驗結(jié)果：

ATP及LPS處理THP-1細胞后，細胞上清和細胞裂解液中的Caspase-1的表達量如圖2所示：

THP-1細胞在加入ATP及LPS處理后，細胞上清和細胞裂解液中的Caspase-1的表達量均增加，尤其是細胞裂解液中的Caspase-1的表達量明顯高于未處理組， Caspase-1的表達量大約增加了24倍，這也很好的佐證了Caspase-1定位表達于THP-1細胞內(nèi)的相關研究。