磷酸化多抗和單抗的制備
蛋白質(zhì)的翻譯后修飾在蛋白質(zhì)組學(xué)研究領(lǐng)域具有重要地位,近年來表現(xiàn)出更為火爆的趨勢。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)在翻譯后會在不同的基團上發(fā)生不同的修飾,如磷酸化、糖基化、甲基化、乙?;?。蛋白質(zhì)磷酸化是各種蛋白質(zhì)修飾方式中最為常見、最重要的一種,它由蛋白激酶和磷酸酶,這兩個作用相反的酶系構(gòu)成,是一個可逆的過程。研究發(fā)現(xiàn),蛋白質(zhì)的可逆磷酸化幾乎涉及到生物體內(nèi)多種生理和病理過程,如糖代謝、光合作用、細胞的生長發(fā)育、基因表達、神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放,甚至癌變等等,在細胞的信號傳遞過程中占有極其重要的地位,是細胞生命活動的調(diào)控中心。磷酸化的抗體可以特異性的識別蛋白質(zhì)磷酸化位點,可以作為蛋白質(zhì)是否磷酸化的重要檢測工具,而且可以在避免放射性污染的情況下,對磷酸化蛋白進行定性和定量分析,因此特異性磷酸化抗體是研究蛋白質(zhì)磷酸化的重要工具。
磷酸化抗體和非磷酸化抗體在研究中的應(yīng)用各有不同,制備工藝上也有所區(qū)別,主要表現(xiàn)在以下幾個方面:
1、磷酸化抗體是針對蛋白磷酸化位點設(shè)計制備的,主要用于檢測蛋白磷酸化的變化情況。
2、非磷酸化抗體(普通抗體)是針對蛋白非磷酸化位點設(shè)計制備的,主要檢測組織或細胞中該蛋白的表達情況,組織特異性或亞細胞地位,也可以作為磷酸化水平變化的內(nèi)參等。
3、普通抗體的合成:蛋白或者偶聯(lián)多肽->免疫動物->收獲多抗(細胞融合->腹水制備->單抗純化)。
4、磷酸化抗體合成:人工合成含磷酸化位點的多肽->人工體外磷酸化->多肽偶聯(lián)載體->免疫動物->收獲多抗(細胞融合->腹水制備->單抗純化)。
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