Cloud-Clone Corp. BCA蛋白定量試劑盒的分析
目前世界上最常用于蛋白濃度檢測的試劑盒為:BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford法蛋白定量試劑盒(BradfordProtein Assay Kit)。BCA法具有簡單、穩(wěn)定、靈敏的特點。
BCA法測定蛋白濃度兼容性也很好,因為它不受大部分樣本中其他成分的影響。對于5%以內(nèi)的SDS、Triton X-100、Tween 20、Tween 80具有很好的兼容性。在50~1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系,最小檢出量為25μg/ml。
當(dāng)然,武漢云克隆公司也研發(fā)了自己的BCA蛋白濃度測定試劑盒。那么現(xiàn)就標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)OD(450nm)值,樣品OD(450nm)值,內(nèi)控回收率及變異系數(shù)等方面將自配試劑盒與Thermo試劑盒進行比較分析。
1、原始OD(450nm)比較
自配試劑盒與Thermo試劑盒原始數(shù)據(jù)對比表如下:
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線及標(biāo)準(zhǔn)OD值(450nm)比較
經(jīng)過自配試劑盒與Thermo試劑盒的比較及實驗結(jié)果分析得知:自己配制的試劑盒與Thermo試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好,R2值為0.9995。
3、樣品OD值比較及內(nèi)控回收率
采用自己配制的BSA標(biāo)準(zhǔn)品作為Thermo試劑盒的內(nèi)控,高值(1000ug/ml)回收率為95.5%,低值(125ug/ml)回收率為110.7%;采用Thermo的BSA標(biāo)準(zhǔn)品作為自己配制試劑盒的內(nèi)控,高值回收率和低值回收率分別為97.57%和105.98%。(內(nèi)控回收率一般應(yīng)控制在80%~120%)
4、變異系數(shù)比較
分別用自配試劑盒與Thermo試劑盒測定樣品B970,ZBP1-1,A503,SLIT3-3和PE4,測定的變異系數(shù)在10%以內(nèi)。
通過從標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)OD(450nm)值,樣品OD(450nm)值,內(nèi)控回收率及變異系數(shù)等方面對自配試劑盒與Thermo試劑盒進行對比分析,我們可以了解到:云克隆自配BCA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好,R2值可達0.9995,內(nèi)控回收率可控于95%-111%之間,且變異系數(shù)小于10%。這些數(shù)據(jù)充分證明了云克隆BCA蛋白定量試劑盒的穩(wěn)定性強與靈敏度高。
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