大腦中動脈阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性腦缺血模型,MCAO 模型先阻斷頸外動脈（ECA）及其分支，且阻斷翼腭動脈（PPA），以切斷顱外來源的側副循環(huán)血流。從ECA插入尼龍線，經(jīng)頸內動脈（ICA）到大腦前動脈（ACA），機械性阻斷大腦中動脈（MCA）發(fā)出處的血供來建立大腦中動脈缺血模型。此模型可在無麻醉狀態(tài)下拔出尼龍線，恢復血流，實現(xiàn)再灌注。 線栓法具有不開顱、效果肯定、可準確控制缺血及再灌注時間的優(yōu)點，用于研究神經(jīng)元對缺血的敏感性、耐受性，藥物療效觀察以及再灌注損害和治療時間窗較為理想，同時也具有對全身影響小、動物存活時間長的特點，適于慢性腦損傷的研究?？刂坪靡鬃円蛩兀杀苊鈱嶒灲Y果的不穩(wěn)定性。

1.實驗動物

SPF級Wistar大鼠，健康，雄性，體重為250g-300g。

2.實驗分組

    實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組，每組15只動物。

3.主要試劑

2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride（sigma）

4.建模方法

1.15%水合氯醛麻醉大鼠，頸部備皮，消毒，插入肛溫探頭，保持體溫在37±0.5℃。

2.頸部正中切口，暴露右側頸總動脈，頸內動脈和頸外動脈。使用6-0絲線在距離頸總動脈分叉4mm處結扎頸外動脈遠心端，在頸外動脈穿入另一根6-0絲線，在靠近頸總動脈分叉處打一個活結。

3.使用動脈夾夾閉頸總動脈。在距離頸總動脈分叉處3mm處的頸外動脈上剪一個小口，將一根頭端處理過的0.33mm直徑的尼龍線從小口中插入，進入頸內動脈，并向內插入大腦中動脈，尼龍線的插入深度距離頸總動脈分叉處約16±1mm。

4.缺血后90min拔掉線栓，用6-0絲線結扎外動脈近心端，用3-0絲線縫合頸部傷口，活力碘消毒傷口，將大鼠放在加熱墊上，待清醒后放入恒溫撫養(yǎng)箱飼養(yǎng)。

5.術后24h，對小鼠進行神經(jīng)功能評分，然后腹腔注射15%水合氯醛麻醉大鼠，取大腦進行TTC染色和病理染色

  5模型的評價

1.神經(jīng)功能缺失體征評分 

參考Longa及Bederson的5分制法在動物麻醉清醒后24h進行評分，分值越高,說明動物行為障礙越嚴重。

0分:無神經(jīng)損傷癥狀

1分:不能完全伸展對側前爪

2分:向對側轉圈

3分:向對側傾倒

4分:不能自發(fā)行走,意識喪失

2.TTC染色

麻醉大鼠后，取大鼠腦組織，放入-20℃冰箱冷凍30min。用PBS配置1% TTC（W/V），37℃水浴至TTC溶解，將凍好的腦組織切片，置于10ml TTC溶液中，37℃恒溫孵育10min。不時翻動腦片，使組織均勻染色。正常腦組織染色后呈鮮紅色，而梗死區(qū)呈蒼白色。

3.病理學評價

取腦后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脫水后，經(jīng)OCT包埋做冰凍切片，切片10um，做尼氏染色，可做梗死面積的評價。

尼氏體（Nissl body）：是胞質內的一種嗜堿性物質，廣泛見于各種神經(jīng)元，但其形狀大小和數(shù)量則各有差異。在生理情況下,尼氏體大而數(shù)量多,反映神經(jīng)細胞合成蛋白質的功能較強,在神經(jīng)元受損時,尼氏體的數(shù)量可減少甚至消失。

圖1. TTC染色圖（白色表示梗死組織，紅色表示正常組織）