一、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞胞膜分子

1. 細(xì)胞重懸：細(xì)胞處理計數(shù)后，用細(xì)胞洗液（含2% BSA的PBS）重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度為1×10⁷/mL；

2. 對照設(shè)置：空白對照、同型對照、待測樣本每管取100uL上述重懸的細(xì)胞，使每管細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×106/管；

3. 一抗孵育：空白對照管不加抗體，同型對照管和待測樣本管分別加入5-20uL同型抗體和靶標(biāo)抗體（具體使用量參照說明書），充分混勻，至4℃孵育30min或冬季可至于室溫孵育30min，孵育期間每隔10min晃動一下反應(yīng)管，使細(xì)胞和抗體充分反應(yīng)；

4. 細(xì)胞清洗：加入適量細(xì)胞洗液，1000rpm離心5min，棄上清，反復(fù)洗滌2次；

5. 細(xì)胞重懸：使用100μL細(xì)胞洗液重懸細(xì)胞；

6. 二抗孵育：同型對照管和待測管分別加入適量的熒光標(biāo)記的二抗，充分混勻，至4℃避光孵育30min或冬季可至于室溫避光孵育30min，孵育期間每隔10min晃動一下反應(yīng)管；

7. 細(xì)胞清洗：加入適量細(xì)胞洗液，1000rpm離心5min，棄上清，反復(fù)洗滌2次；

8. 上機(jī)檢測：使用100-200μL細(xì)胞洗液重懸細(xì)胞，先測空白管和同型對照管，再測待測管。

二、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞胞漿分子

1. 準(zhǔn)備細(xì)胞：細(xì)胞處理計數(shù)后，1000rpm離心5min，棄上清，用細(xì)胞洗液（含2% BSA的PBS）滌細(xì)胞一次；

2. 細(xì)胞固定：按照每2×10⁶個細(xì)胞加入1mL 4%多聚甲醛的比例使用4%多聚甲醛固定細(xì)胞，室溫固定10~15min；

3. 細(xì)胞清洗：加入細(xì)胞洗液，1000rpm離心5min，棄上清，重復(fù)清洗一次；

4. 細(xì)胞破膜：用破膜劑重懸細(xì)胞，加入至1.5mL EP管中，1*10⁶/管，體積為100μL/管；

5. 對照設(shè)置：空白對照、同型對照、待測樣本每管取100uL上述重懸的細(xì)胞，使每管細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×10⁶/管；

6. 一抗孵育：空白對照管不加抗體，同型對照和待測管分別加入5-20uL同型抗體和靶標(biāo)抗體（具體使用量參照說明書），充分混勻，至4℃孵育30min或冬季可至于室溫孵育30min，孵育期間每隔10min晃動一下反應(yīng)管，使細(xì)胞和抗體充分反應(yīng)；

7. 細(xì)胞清洗：加入適量的穿膜劑，1000rpm離心5min，棄上清，重復(fù)洗滌細(xì)胞2次；

8. 細(xì)胞重懸：用100uL穿膜劑重懸細(xì)胞；

9. 二抗孵育：同型對照管和待測管分別加入適量的熒光標(biāo)記二抗，充分混勻，至4℃避光孵育30min或冬季可至于室溫避光孵育30min，孵育期間每隔10min晃動一下反應(yīng)管；

10. 細(xì)胞清洗：加入適量的穿膜劑，1000rpm離心5min，棄上清，重復(fù)洗滌細(xì)胞2次；

11. 上機(jī)檢測：用100-200uL穿膜劑重懸細(xì)胞，先測空白管和同型對照管，再測待測管。