Massimiliano Mazzone研究團(tuán)隊(duì)在《Cell Metabolism》上發(fā)表的最新研究進(jìn)展表明：表達(dá)Podoplanin（PDPN）的巨噬細(xì)胞能夠促進(jìn)乳腺癌的淋巴管生成和轉(zhuǎn)移，為研究乳腺癌的發(fā)生發(fā)展提供了新的思路。

研究發(fā)現(xiàn)：PDPN參與腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞（TAMs）與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞（LEC）的粘附。從機(jī)制上講，PDPN與LEC來(lái)源的galectin 8（GAL8）的結(jié)合，促使Integrin b1被激活。當(dāng)接近淋巴管時(shí)，表達(dá)PDPN的TAM亞群（又名PoEMs），刺激局部基質(zhì)重塑并促進(jìn)血管生長(zhǎng)和淋巴侵襲。小鼠模型表明去除PoEMs或抑制galectin 8的作用可抑制乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，又進(jìn)一步證實(shí)了PoEMs與乳腺癌的臨床相關(guān)性。

具體研究過(guò)程和結(jié)論如下：

PoEMs促進(jìn)基質(zhì)轉(zhuǎn)換和轉(zhuǎn)移：

研究人員以乳腺癌細(xì)胞系4T1作為載體，發(fā)現(xiàn)PDPN特異性的高表達(dá)于TAM。那么，PDPN⁺ TAMs（即PoEMs）以及PDPN^- TAMs（即non-PoEMs）在腫瘤中的表達(dá)空間分布是否會(huì)有差異呢？通過(guò)組織學(xué)的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)PoEMs更多的分布在靠近淋巴管或黏附在淋巴管的位置。Gene ontology富集分析發(fā)現(xiàn)PoEMs的高表達(dá)與細(xì)胞外基質(zhì)重塑和重組密切相關(guān)，但與細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的相關(guān)性卻不大。

PDPN促進(jìn)腫瘤淋巴管生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移：

那么，PDPN高表達(dá)發(fā)揮了什么樣的生物學(xué)功能呢？研究人員以WT→WT和PDPN KO→WT小鼠對(duì)照，比較淋巴管總面積、管腔大小，發(fā)現(xiàn)PDPN KO→WT小鼠相對(duì)于對(duì)照組顯著降低，同時(shí)發(fā)現(xiàn)CK14⁺的乳腺癌細(xì)胞明顯減少。切除淋巴結(jié)后植入4T1乳腺癌細(xì)胞，選用肺轉(zhuǎn)移作為評(píng)估對(duì)象，比較淋巴擴(kuò)散的速度，發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)切除的WT→WT小鼠肺轉(zhuǎn)移明顯減少，而PDPN KO→WT小鼠幾乎沒(méi)有出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移。也就是說(shuō)，PDPN促進(jìn)了腫瘤的轉(zhuǎn)移。

以上數(shù)據(jù)可以看出，PoEMs促進(jìn)腫瘤淋巴管生成和淋巴轉(zhuǎn)移，并有利于癌細(xì)胞進(jìn)入淋巴循環(huán)。

GAL8是乳腺癌轉(zhuǎn)移和進(jìn)展的關(guān)鍵因素：

GAL8是一種由淋巴管大量表達(dá)的分泌性糖結(jié)合蛋白，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附和遷移，是公認(rèn)的可作用于PDPN的一種物質(zhì)。在4T1的腫瘤切片中觀察到GAL8表達(dá)于腫瘤淋巴管和一些CD45⁺免疫細(xì)胞卻并不表達(dá)于腫瘤血管。并比較GAL8與PDPN WT 及PDPN KO骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞（BMDMs）的結(jié)合能力，發(fā)現(xiàn)PDPN缺失之后GAL8的結(jié)合能力明顯受影響。當(dāng)檢測(cè)巨噬細(xì)胞的遷移能力的時(shí)候，又發(fā)現(xiàn)PDPN缺失之后，巨噬細(xì)胞的遷移能力會(huì)完全喪失，進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PDPN的缺失也會(huì)影響BMDMs向淋巴內(nèi)皮細(xì)胞（LECs）遷移。研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步驗(yàn)證GAL8對(duì)TAMs的作用，以腫瘤淋巴管特異性GAL8條件性敲除小鼠作為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)：

1. CD45⁺免疫細(xì)胞仍會(huì)表達(dá)GAL8；

2. 腫瘤淋巴管的區(qū)域明顯減少；

3. TAMs向淋巴管的遷移能力明顯降低；

4. 肺轉(zhuǎn)移明顯減少。

除此之外，PoEMs的遷移和黏附也依賴于GAL8介導(dǎo)的Integrin b1的激活。

我們注意到，在Confocal實(shí)驗(yàn)中用到的抗小鼠GAL8抗體來(lái)自于云克隆公司。不得不說(shuō)，云克隆公司除了ELISA試劑盒之外，抗體也逐漸被大家所認(rèn)可。

PDPN參與腫瘤微環(huán)境基質(zhì)重塑：

假設(shè)PDPN參與了某些基因上游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，隨機(jī)選取前100個(gè)上調(diào)型轉(zhuǎn)錄子，發(fā)現(xiàn)其中4個(gè)基質(zhì)金屬蛋白酶（Mmp2，Mmp9，Mmp12和 Mmp13）和8個(gè)膠原蛋白（Col1a1, Col1a2, Col3a1, Col5a2, Col5a3, Col5a1, Col6a2和 Col6a3）在PoEMs中明顯上調(diào)。有趣的是，靠近腫瘤淋巴管的一群PoEMs大量表達(dá)Col1a1和Col1a2，在4T1的組織學(xué)檢測(cè)中，也發(fā)現(xiàn)PODN的敲除會(huì)減少膠原蛋白的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)PDPN不僅僅只是單純的促進(jìn)TAMs向腫瘤淋巴管遷移，還會(huì)通過(guò)基質(zhì)重塑大大促進(jìn)腫瘤淋巴結(jié)的生長(zhǎng)。

PoEMs與乳腺癌的臨床相關(guān)性：

以上的研究為人乳腺癌的研究提供了有力的證據(jù)，將以上研究結(jié)論應(yīng)用于乳腺癌患者，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)：

1. 人的PoEMs向分泌型GAL8遷移，而non-PoEMs卻并不會(huì)；

2. 人PDPN⁺的單核巨噬細(xì)胞向LECs遷移的能力比PDPN^-巨噬細(xì)胞更強(qiáng)，并且如果沉默表達(dá)GAL8的目的基因，該遷移能力將會(huì)喪失；

3. 乳腺癌患者有淋巴結(jié)和器官轉(zhuǎn)移時(shí)，PoEMs的數(shù)量會(huì)明顯增多；

4. 乳腺癌患者的GAL8表達(dá)于腫瘤淋巴管和一些浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞，而不表達(dá)于腫瘤血管。

從目前來(lái)看，PoEMs可促進(jìn)小鼠和人乳腺癌淋巴管生成和淋巴播散，而對(duì)于其他腫瘤是否有著類(lèi)似的作用仍然有待研究，該研究為今后其他腫瘤研究提供了新思路。該研究也再次向我們展示了免疫細(xì)胞的特性與它們所處微環(huán)境的密切聯(lián)系。

非常感謝研究人員對(duì)云克隆產(chǎn)品的信任，未來(lái)的道路仍然任重道遠(yuǎn)，但有大家的支持，我們相信我們會(huì)越做越好。