“病毒”二字依據(jù)拆文解字意為引起疾病的毒素，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對其定義不謀而合。病毒是一類獨(dú)特的傳染因子，它能夠利用宿主細(xì)胞的營養(yǎng)物質(zhì)來自主地復(fù)制自身的DNA或RNA、蛋白質(zhì)等生命組成物質(zhì)的微小生命體。病毒的顯著特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡單，微小到甚至無法用普通顯微鏡觀察，而且無法脫離活體進(jìn)行獨(dú)立的代謝活動(dòng)和復(fù)制。

如此常見卻又特別的病毒，要如何開展相應(yīng)的科學(xué)研究呢？

從病毒特點(diǎn)中不難發(fā)現(xiàn)，它賴以生存的關(guān)鍵點(diǎn)就是活體細(xì)胞。隨著對各類病毒的研究深入，迫切需要通過易感細(xì)胞建立體外感染模型。也就是本文題目中的提到的模擬病毒生存發(fā)展的“擬”生長。

  我們以引發(fā)全球性公共衛(wèi)生問題的乙肝病毒（Hepatitis B virus, HBV）作為研究對象進(jìn)行體外感染的模擬實(shí)驗(yàn)的小科普。HBV是嗜肝病毒（如圖1）,肝臟是其主要的侵犯和復(fù)制場所,因此肝源細(xì)胞就成病毒DNA轉(zhuǎn)染的首選靶細(xì)胞，研究者們選用的是經(jīng)過轉(zhuǎn)化后連續(xù)傳代培養(yǎng)的分化的肝癌細(xì)胞,如HepG2細(xì)胞系^[1]。

圖1 乙肝病毒為嗜肝病毒（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）

病毒體外感染形式分為兩種：一種是用病毒直接感染細(xì)胞(如骨髓中的淋巴細(xì)胞、人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞系Bewo細(xì)胞等^[2]，觀察病毒的形態(tài)，確定細(xì)胞是否可被病毒體外感染以及研究病毒與細(xì)胞的相互作用為后續(xù)建立病毒檢測、預(yù)防感染與治療提供依據(jù)。

另外一種為了更深層次研究病毒基因組的功能，闡述乙肝病毒嵌入人類基因組的機(jī)制和病毒致癌的部分機(jī)制。通過構(gòu)建乙肝病毒基因重組腺病毒載體，將攜帶HBV基因的重組腺病毒感染HEK293細(xì)胞進(jìn)行包裝、擴(kuò)增、分離純化,將擴(kuò)增得到的HBV感染HepG2細(xì)胞^[3]。鑒于病毒體外感染細(xì)胞模型的建立有助于對病毒顆粒形態(tài)、致病機(jī)理、復(fù)制與表達(dá)等基礎(chǔ)性研究，而基礎(chǔ)性研究的進(jìn)展也促進(jìn)體外細(xì)胞感染模型的建立^[4-5]。

在細(xì)胞模型已取得成功的基礎(chǔ)上，更多的研究人員已將目光鎖定在動(dòng)物模型上。廈門大學(xué)夏寧邵教授團(tuán)隊(duì)和浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院李君教授團(tuán)隊(duì)歷經(jīng)5年的協(xié)同攻關(guān)，建立了國際上第一個(gè)高度模擬人類乙肝病毒（HBV）自然感染誘發(fā)的慢乙肝肝硬化小鼠模型。這是國內(nèi)外首次利用單種的人BMSC移植實(shí)現(xiàn)了人同源肝細(xì)胞與多種免疫細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的雙重嵌合，成功模擬了人類HBV自然感染和乙肝肝硬化發(fā)病過程，解決了HBV感染與發(fā)病機(jī)制研究和抗乙肝肝硬化新藥研發(fā)缺少高質(zhì)量動(dòng)物模型的國際難題。

圖2 人類乙肝病毒（HBV）自然感染誘發(fā)的慢乙肝肝硬化小鼠模型

云克隆一直致力于服務(wù)全球科研人員，提供優(yōu)質(zhì)的檢測產(chǎn)品以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。我們深知細(xì)胞感染模型的重要性，我司目前可以提供成熟的腺病毒，慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)，也可制作千余種動(dòng)物模型，涉及各種人類疾病動(dòng)物模型、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型和基因敲除動(dòng)物模型。旨在為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。

[服務(wù)項(xiàng)目內(nèi)容]

????一、病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

二、腫瘤移植(TT)小鼠模型（示例）

目前在肝癌研究中多采用異體移植法將腫瘤細(xì)胞株注射到動(dòng)物皮下形成局部瘤塊來構(gòu)建移植瘤模型，相比機(jī)體原發(fā)性肝癌的形成及病理生理學(xué)變化仍有一定不同。通過向裸鼠肝臟注射肝癌細(xì)胞建立肝臟原位腫瘤模型，觀察其原位瘤成瘤的過程及狀態(tài)，能較好的模擬人體肝癌生長過程，為進(jìn)一步抗肝癌免疫研究提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
1. 細(xì)胞株： 熒光素酶基因標(biāo)記的人肝癌細(xì)胞株HepG2-luc。
2. 裸鼠肝臟原位成瘤模型的建立：
2.1 將標(biāo)準(zhǔn)條件下培養(yǎng)的處于對數(shù)生長期的HepG2-luc 細(xì)胞消化、離心，將所得的約 5×10 ⁶ 個(gè)細(xì)胞溶于 0.1 mL DMEM 培養(yǎng)液待用。
2.2 使用3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠，待麻醉生效后，開腹暴露肝臟，用1ml胰島素注射針取準(zhǔn)備好的細(xì)胞注射于裸鼠肝臟內(nèi)，用5-0絲線縫合傷口，活力碘消毒傷口，將裸鼠放在加熱墊上，待清醒后正常飲食飼養(yǎng)。
3. 熒光活體成像檢測：在成瘤后對裸鼠進(jìn)行生物發(fā)光活體成像檢測，成像前使用3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠，再通過腹腔注射3mg底物 luciferin，底物注射后20~30分鐘后進(jìn)行生物發(fā)光活體成像檢測。

圖3 生物發(fā)光活體成像檢測結(jié)果

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參考文獻(xiàn)：

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