還在用蛋清親和素?那你就out了,試試云克隆鏈霉親和素。
鏈霉親和素是一種來源于阿維丁鏈霉菌(streptomyces avidinii)的生物素結(jié)合蛋白,其非特異性結(jié)合遠比親和素低,蛋清親和素含有大約7%的碳水化合物,且在中性pH值下帶凈正電荷,而鏈霉親和素不含有碳水化合物,且在中性pH值下幾乎不帶凈電荷,所以它被廣泛用來作為抗生物素蛋白的替代品。在結(jié)構(gòu)上,鏈霉親和素以同源四聚體的形式存在,每摩爾分子可結(jié)合四摩爾的生物素分子,該特性使其廣泛應(yīng)用于多種生物化學(xué)及免疫學(xué)檢測的信號放大體系。此外,本品還可用于多種酶和化合物的標記以及蛋白純化。 目前云克隆云克隆鏈霉親和素產(chǎn)品如下:IS120 鏈霉親和素;IS089 辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素; 除了以上兩種產(chǎn)品,云克隆還能提供各種熒光標記的鏈霉親和素產(chǎn)品。 下面以辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素為例,看看其在免疫學(xué)檢測中的應(yīng)用。 1.應(yīng)用于ELISA實驗 板底預(yù)包被抗OVA抗體(貨號:MAB459Ge21)濃度為2ug/ml,添加OVA初始濃度為50ng/ml,依次倍比稀釋。稍后添加1ug/ml抗OVA抗體(貨號:LAB459Ge71)。最后添加1ug/ml辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素(貨號:IS089)進行顯色讀數(shù)。 結(jié)果如下:
圖1 ELISA實驗 2. .應(yīng)用于IHC實驗
圖2 增殖細胞核抗原(PCNA)的免疫組化實驗 對人乳房組織進行微波抗原修復(fù)預(yù)處理,接著加入濃度為5ug/ml抗PCNA抗體(貨號:CAA591Hu22)進行孵育。孵育后添加1ug/ml生物素標記山羊抗鼠二抗(貨號:SAA544Mu17)緊隨其后加入1ug/ml辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素 (貨號:IS089)。采用DAB作為顯色劑,組織切片用蘇木精復(fù)染,用樹脂封閉后鏡檢。 云克隆生產(chǎn)的鏈霉親和素活性高且性能穩(wěn)定,其活性大于16u/mg(1個酶活位可以結(jié)合1ug D-biotin)。其在相同的實驗條件下,標記HRP后的SA與某知名廠家同類產(chǎn)品性能基本保持一致。穩(wěn)定實驗顯示4℃放置一周測值基本無變化,加速破壞試驗37℃放置一周測值下降<5%。作為診斷試劑原料供應(yīng)商,云克隆可持續(xù)性的大批量供應(yīng)高活力且性能穩(wěn)定的鏈霉親和素。