那些和睡眠相關(guān)的分子——從色氨酸到褪黑素
褪黑素是由人和多種動物松果體產(chǎn)生的一種吲哚激素(聽起來很熟悉吧,早年學(xué)的植物生長素也是吲哚類——吲哚乙酸),當(dāng)然褪黑素比生長素結(jié)構(gòu)要復(fù)雜那么一丟丟,見圖1。
褪黑素于1959年由Lerner等人從牛松果體中首次分離。我們來看看它在體內(nèi)產(chǎn)生的過程:首先色氨酸被羥基化生成5-羥基色氨酸,然后脫羧成5-羥色胺(5-HT),再經(jīng)過乙?;蔀镹-乙?;?5-羥基色胺,最終甲基化生成N-乙酰基5-甲氧基色胺,也就是褪黑素了,見圖2。這個通路中的限速環(huán)節(jié)在于第三步的乙?;?/p>
研究表明褪黑素與晝夜節(jié)律(睡眠)、動物生殖以及多種疾病都相關(guān)。它高度受神經(jīng)輸入調(diào)節(jié),白晝合成低,夜間合成高,并且這個規(guī)律和機體的晝夜活動是不相關(guān)的。但是短暫的夜間光照會快速抑制AANAT的活性,當(dāng)環(huán)境恢復(fù)后數(shù)小時內(nèi)AANAT活性就會恢復(fù)并保持其應(yīng)有的高水平,直到正常的活性下降時間。 褪黑素在血液中的含量低,對其定量較難,定量方法從最初的質(zhì)譜到隨后的放射免疫再到近年的酶聯(lián)免疫。從操作難易程度來看,酶聯(lián)免疫法相對更有優(yōu)勢。 褪黑素,作為化學(xué)小分子,因分子量小,不具備2個抗原結(jié)合位點,所以僅與一個特異性抗體結(jié)合,適用競爭抑制法進行檢測。而小分子作為半抗原不具有免疫原性,所以在制備抗體前需要對其進行抗原性改造,我們通過對吲哚基上不同位點進行修飾和載體偶聯(lián),比較其抗原性的優(yōu)劣,最后選定2號碳作為修飾位點,修飾后偶聯(lián)載體作為免疫原免疫動物獲取抗體。該抗體的競爭抑制曲線如圖3所示。
使用云克隆褪黑素檢測試劑盒CEA908Ge的研究發(fā)表的部分文章如下: