國內(nèi)首家基于流式熒光發(fā)光法（Flow Luminescence Immunoassay，F(xiàn)LIA）自主研發(fā)的多因子檢測試劑盒（Multiplex Assay Kit），可實現(xiàn)快速高效的蛋白質(zhì)分析。僅需20μL樣本即可實現(xiàn)多種蛋白的同步檢測，極大減少檢測樣本使用量、時間、人力和經(jīng)費支出。目前云克隆Multiplex Assay Kit已涵蓋人、大鼠、小鼠等10多種物種、2000多個檢測指標(biāo)，可應(yīng)用于疾病機理探索、藥理藥效及安全性評價實驗。

作為一項熱門的檢測技術(shù)，多因子檢測技術(shù)備受研究工作者的關(guān)注，并針對產(chǎn)品提出不少技術(shù)問題。在本篇文章中，我們整理了常見的實驗問題，為大家答疑解惑。

Q1 Multiplex Assay Kit適用的樣本類型包括哪些？

A1 樣本：血清、血漿、組織勻漿上清、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清和其它生物液體(腦脊液、肺泡灌洗液、唾液等)。

Q2 目前一盒Multiplex Assay Kit能檢測多少個靶標(biāo)？

A2 一盒能測1-8個靶標(biāo)，超過8個靶標(biāo)，分成多個小于或等于8個靶標(biāo)。

Q3 一盒Multiplex Assay Kit能測多少例樣本？

A3 一個試劑盒有96test，每組標(biāo)曲使用7test。所以，有89test可用于樣本檢測。而實驗是否安排預(yù)實驗和復(fù)孔會進一步改變可檢測的樣本數(shù)量。

Q4 標(biāo)準(zhǔn)品和樣本是否需要做復(fù)孔？

A4 主要取決于客戶的選擇。Multiplex Assay Kit的檢測每個樣本孔單個靶標(biāo)會測定50個磁性微球的信號取中位值，所以在檢測準(zhǔn)確性和客觀性上是很好的，一般無需設(shè)置復(fù)孔，但客戶如關(guān)心偶然的操作誤差，也可以考慮對標(biāo)準(zhǔn)品和樣本設(shè)置復(fù)孔。

Q5 Multiplex Assay Kit的樣本如何處理？

A5 樣本處理與ELISA試劑盒的樣本處理方法一樣。

樣本處理方法鏈接如下：

http://m.02e5ac.cn/topic/201804271043087152.html

http://m.02e5ac.cn/topic/201805141347467275.html

Q6 Multiplex Assay Kit檢測時樣本是否需要稀釋？是否提供樣本稀釋液？

A6 血清/血漿樣本，我們根據(jù)內(nèi)部驗證結(jié)果推薦樣本稀釋倍數(shù)。其他樣本類型建議客戶自行做預(yù)實驗確定樣本合適的稀釋比例。試劑盒中未配備樣本稀釋液，如客戶樣本需要稀釋，建議用0.01mol/L PBS。

Q7 Multiplex Assay Kit的有效期多久？

A7 有效期為1年。

Q8 Multiplex Assay Kit的貨期多久？

A8 靶標(biāo)物數(shù)量小于等于4，貨期1-3周；靶標(biāo)物大于4，貨期3-4周；

如果訂購試劑盒數(shù)量多，貨期可能需延長。如需加急，請訂購時提出。

Q9 Multiplex Assay Kit試劑盒組分中是否有QC？

A9 試劑盒組分中不含QC，如客戶需要，我們也可提供。

Q10 Multiplex Assay Kit檢測范圍和靈敏度。

A10 流式熒光發(fā)光法檢測試劑盒分為單因子檢測試劑盒和多因子檢測試劑盒。單因子檢測試劑盒檢測范圍和靈敏度可參考官網(wǎng)產(chǎn)品頁面信息。多因子檢測試劑盒屬于定制產(chǎn)品，需要制備后才有準(zhǔn)確信息。通常多因子檢測試劑盒的檢測范圍和靈敏度與單因子檢測試劑盒一樣。如果客戶對于檢測范圍和靈敏度有要求，請訂購前和我們溝通，我們會依據(jù)客戶需求調(diào)整檢測范圍和靈敏度，盡可能滿足客戶的要求。

Q11 Multiplex Assay Kit各種性能如何驗證？

A11 穩(wěn)定性：37℃破壞性實驗。

批次差異：出貨前我們會安排驗證，確保批內(nèi)差和批間差都小于10%。

特異性：單因子檢測試劑盒會驗證結(jié)構(gòu)和功能類似物，多因子檢測試劑盒會驗證組合間的各因子間是否存在干擾。

Q12 Multiplex Assay Kit中磁性微球是什么材質(zhì)？試劑盒試劑中是否含有乙醇或其他表面活性劑？

A12 磁性微球核心是氧化鐵，覆蓋有羧基材料和其他塑料成分。磁性微球用熒光染色法進行編碼，通過調(diào)節(jié)兩種熒光染料的不同配比來獲得多達100種不同的磁性微球。試劑盒試劑不含有乙醇或其他表面活性劑。

Q13 Multiplex Assay Kit中的磁性微球和其他公司的luminex磁性微球是否通用？

A13 與其他公司的luminex磁性微球通用，但是由于偶聯(lián)技術(shù)以及實驗所使用的抗體對的差異，不建議不同試劑盒的微球和試劑混用。

Q14 如何將抗體結(jié)合到磁性微球上？

A14 一般采用羧基氨基偶聯(lián)法。部分指標(biāo)采用此方法實驗效果不理想時，會更換偶聯(lián)方法。

Q15 磁性微球的直徑有多長？

A15 磁性微球的直徑為6.5μm。

Q16 是否能夠提供包被蛋白或抗體的磁性微球？

A16 可以提供。如無特殊要求，磁性微球的數(shù)量按2500粒/孔/靶標(biāo)計算。包被蛋白或抗體的磁性微球產(chǎn)品可以出具驗證報告，建議4℃保存，不能冷凍保存。

Q17 代測樣本需要怎么寄送？

A17 有條件用干冰，若無干冰，也可使用冰袋，盡量保持低溫運輸。

Q18 代測的樣本建議放在什么樣本管中？

A18 建議用尖底的EP管裝樣品，0.5mL的EP管最好，用1.5或2mL甚至更大的EP管裝液體樣本送樣會增加取樣損耗，同時樣本蒸發(fā)&管壁粘附也會導(dǎo)致樣品損失，所以寄送時需要算上10%的損耗。

Q19 代測實驗要求寄送的樣本體積是多少？

A19 對于樣本中靶標(biāo)物濃度低的，如果客戶樣本充足的話，建議提供110μL/例/盒，如果不充足建議至少提供60μL/例/盒，如果樣本量少于60μL/例/盒，實驗時會用樣本稀釋液將樣本稀釋至100μL后進行實驗，如果樣本中靶標(biāo)含量低，就可能存在測不到的風(fēng)險。

Q20 代測實驗一盒試劑盒分兩次測，代測費還是按5000元/盒收嗎?

A20 如果兩次實驗是同一批樣本預(yù)實驗&正式實驗，按一次收費。如果分兩次檢測，且兩次送樣和檢測間隔時間比較長，按兩次收費。

Q21 Multiplex Assay Kit標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合有哪些方法？

A21 常用的擬合方式有兩種：

①濃度和MFI取雙對數(shù)后，二次函數(shù)擬合，參考鏈接如下：

http://m.02e5ac.cn/topic/202208012250497735.html

②濃度和MFI取雙對數(shù)后，四參數(shù)擬合，使用ELISA CALC.軟件。

Q22 讀數(shù)時磁珠數(shù)不足（低于50），測值異常，可能的原因及解決方案有哪些?

A22 原因及解決方案如下：

Q23 Multiplex Assay Kit是否可以用流式細胞儀讀取數(shù)據(jù)?

A23 目前的Multiplex Assay Kit不適用流式細胞儀，但是我們正在開發(fā)適用于流式細胞儀的多因子檢測試劑盒產(chǎn)品，本月已開始測試，敬請期待！

以上是我們本期的分享。如果客戶對于Multiplex Assay Kit還有其它問題，歡迎隨時聯(lián)系我們，我們會盡快給出回復(fù)。