Elisa實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)者經(jīng)常會需要處理細(xì)胞、組織等樣本，而樣本的處理對于Elisa實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。對于常見的液體樣本（如血清、血漿、培養(yǎng)上清等），我們的處理方法比較簡單，一般簡單離心取上清液即可用于后續(xù)檢測。然而對于細(xì)胞，組織樣本，我們需要進(jìn)行一定的處理使靶物質(zhì)充分釋放溶解，才能用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)檢測。一般情況下，物理方法如反復(fù)凍融、勻漿、超聲等，不會引入化學(xué)及生物試劑，可推薦用于細(xì)胞，組織樣本的處理，但由于物理處理操作較繁瑣，且有些靶物質(zhì)難以提取釋放完全，因此實(shí)驗(yàn)者們常常需要借助化學(xué)......

目前世界上最常用于蛋白濃度檢測的試劑盒為：BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford法蛋白定量試劑盒（BradfordProtein Assay Kit)。BCA法具有簡單、穩(wěn)定、靈敏的特點(diǎn)。BCA法測定蛋白濃度兼容性也很好，因?yàn)樗皇艽蟛糠謽颖局衅渌煞值挠绊?。對?%以內(nèi)的SDS、Triton X-100、Tween 20、Tween 80具有很好的兼容性。在50～1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，最小檢出量為25μg/ml。當(dāng)然，武漢云克隆公司也研發(fā)了自己的BCA蛋白濃度測定試劑盒。那么現(xiàn)就標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)OD（450nm）值，樣品OD（450nm）值，內(nèi)控回......

高遷移率族蛋白1（High Mobility Group Protein 1），也被稱為二性霉素，由HMGB1基因編碼，由于在聚丙烯酰胺凝膠電泳中有很高的遷移率而被命名為高遷移率族蛋白1。下面我們主要以人HMGB1為參考，對高遷移率族蛋白1進(jìn)行簡要的介紹。蛋白：HMGB1跟組蛋白一樣，HMGB1是最重要的染色質(zhì)蛋白，在維持核小體穩(wěn)定及DNA重組、復(fù)制、修復(fù)及基因轉(zhuǎn)錄扮演重要角色。此外，它在感染、炎癥及免疫反應(yīng)中也發(fā)揮重要的作用。HMGB1也是炎癥損傷的研究熱點(diǎn)之一。已有學(xué)者提出將HMGB1作為DNA疫苗的佐劑和癌癥治療的靶標(biāo)。根據(jù)Uniprot上人HMGB1 鏈接，htt......

通常來說，蛋白質(zhì)基于其一級結(jié)構(gòu)的氨基酸序列，可以用來作為免疫原使用；而其經(jīng)過不同程度的折疊及空間排列后形成的空間構(gòu)象則賦予了它特定的生物學(xué)功能，而在各種蛋白的不同生物學(xué)功能的共同作用下，就實(shí)現(xiàn)了生物的各種生理功能。所以對蛋白活性的研究是現(xiàn)在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，在研究中就需要使用到有活性的蛋白，而天然蛋白是很難獲得的，所以現(xiàn)在所使用的活性蛋白也多是用基因工程的手段獲得的?；蚬こ痰氖侄潍@取蛋白需要經(jīng)過多個步驟，也有多種表達(dá)方式。要獲取活性蛋白，在基因序列、表達(dá)系統(tǒng)以及活性驗(yàn)證等過程中......

內(nèi)參（Internal Control）是指試驗(yàn)系統(tǒng)的內(nèi)部參照，一般對于哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來說是指由看家基因（house keeping gene）編碼表達(dá)的蛋白，他們在各種不同組織和細(xì)胞中的表達(dá)都相對恒定，在實(shí)驗(yàn)中檢測蛋白表達(dá)水平時，常常選來作為參照物。上節(jié)我們介紹了三種常用胞漿的內(nèi)參蛋白（肌動蛋白，β-Actin；β-球管蛋白，β-Tubulin；甘油醛-3-磷酸脫氫酶，GAPDH），這一節(jié)我們將會介紹其他幾種內(nèi)參蛋白。Na/k泵通道蛋白（Na+/K+-ATPase），即Na+/K+-ATP酶，是一種整合膜蛋白。其由1023個氨基酸組成，分子量為113KD。用WB......

Caspase家族作為細(xì)胞凋亡過程中的中心環(huán)節(jié)和執(zhí)行者，與細(xì)胞凋亡等形態(tài)學(xué)特征密切相關(guān)，近年來受到了廣泛的關(guān)注。Caspase-1是Caspase 家族第一個被發(fā)現(xiàn)的蛋白，早在1992年人類就克隆并測序其cDNA，隨后Caspase家族相繼共有14個成員被克隆出。Caspase-1作為凋亡機(jī)制中重要的效應(yīng)成分，主要參與細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)并在死亡受體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑中起輔助作用，參與IL- 1β 的成熟和轉(zhuǎn)運(yùn)，同時還參與凋亡有關(guān)的生理和病理過程，在諸如生長因子、熱休克、細(xì)胞因子和DNA損傷劑等刺激作用下，共同介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)多種凋亡信號傳導(dǎo)途徑......

CD40L（Cluster of differentiation 40 Ligand）和CD40 (Cluster of differentiation 40)是體內(nèi)一對互補(bǔ)的的特異性免疫反應(yīng)系統(tǒng)的共刺激分子， 在抗原呈遞以及免疫反應(yīng)中起重要作用，CD40L和CD40中的任何一個異常均會引起下游的一系列反應(yīng)。CD40是TNFR超家族一員，是I型跨膜糖蛋白，主要在B細(xì)胞中表達(dá)。CD40作為APC（抗原呈遞細(xì)胞）上的共刺激蛋白對APC的活化不可或缺。CD40 可與TRAF1，TRAF2，TRAF3，TRAF5，TRAF6以及TTRAP結(jié)合。CD40L最初發(fā)現(xiàn)于活化的T細(xì)胞表面，是TNF家族中一員， 是Ⅱ型跨膜蛋白。它可以和抗原提呈細(xì)胞（APC)進(jìn)......

現(xiàn)在市面上常用的檢測目的蛋白的ELISA試劑盒通常有兩種，其中一種應(yīng)用雙抗體夾心法，另一種應(yīng)用競爭抑制法，他們的實(shí)驗(yàn)時間通常都在3-5小時，需要準(zhǔn)備多種試劑，分步加入并多次孵育，這樣就對實(shí)驗(yàn)者的操作要求比較高，并且更易于引入人為誤差以及污染。為了提高實(shí)驗(yàn)效率，減少實(shí)驗(yàn)誤差，我們現(xiàn)研發(fā)出只需要1小時就能完成實(shí)驗(yàn)的快速檢測ELISA試劑盒。該類試劑盒應(yīng)用了較常規(guī)試劑盒更靈敏的抗體對，從而使其在極短的時間內(nèi)也能針對性的識別目的分子，并使試劑盒的靈敏度與常規(guī)試劑盒相當(dāng)，甚至更高。這里我們以S100B的檢測試劑盒為例......